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 服務(wù)介紹：

        多酚氧化酶(PPO)檢測試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測原理是以鄰苯二酚作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測定產(chǎn)物生成量的方法，于分光光度計(jì)420nm處檢測吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算，主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的多酚氧化酶活性，尤其適用于檢測水果中多酚氧化酶活性。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、 準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取3g植物組織或水果中層果肉加入6ml預(yù)冷的PPO Lysis Buffer研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以用于該試劑盒的測定

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)?shù)募?xì)胞或組織裂解液，如有必要用PPO Lysis Buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis Buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、 PPO加樣：按照下表設(shè)置對照管、測定管，注意：對照管、測定管中樣品為同一待測樣品，但對照管中為提前加熱煮沸5min的樣品；溶液應(yīng)按照順序依次加入，

       3、 PPO檢測：以對照管為對照(調(diào)零)，比色杯光徑1.0cm，立即分光光度計(jì)測定420nm處測定管的吸光度(記為A_測定0)；1min后立即測定420nm處測定管的吸光度(記為A_測定1)。Leagene建議加入PPO Assay buffer后立即檢測，加樣時(shí)間越短越好，其反應(yīng)基本在1~2min內(nèi)，其后反應(yīng)趨于平緩。

注意：該反應(yīng)系統(tǒng)是利用速率變化，求得相應(yīng)OD的變化，因此加入PPO Assay buffer立即計(jì)時(shí)很重要，每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則有可能由于操作時(shí)間有差異進(jìn)而導(dǎo)致結(jié)果偏差。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

全自動生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運(yùn)輸要求：

1、動植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)

準(zhǔn)確稱取動物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)

全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)

可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

4、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！