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服務(wù)介紹：

      植物過氧化物酶(POD)檢測試劑盒(愈創(chuàng)木酚微板法)檢測原理是以愈創(chuàng)木酚(又稱2-甲氧基酚)作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時間測定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀470nm處測定吸光度，以吸光度變化所需酶量進行計算，主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的過氧化物酶活性，尤其適用于測定水果中過氧化物酶活性。

實驗流程：

1、 準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取0.5-1.0g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的POD Lysis Buffer研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，即為POD粗提液

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于過氧化物酶的測定。

③細胞或組織樣品：取恰當(dāng)細胞或組織裂解液，如有必要用POD Lysis Buffer進行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，即為POD粗提液，

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的過氧化物酶，可以使用POD Lysis Buffer進行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、 配制POD Assay Buffer工作液：取適量的POD氧化劑和POD Assay Buffer，按POD氧化劑：POD Assay Buffer=1：14混合，

3、 POD加樣：取96孔板，按照下表設(shè)置對照孔孔、測定孔，注意：對照孔、測定孔中為同一待測樣品，但對照孔中是提前加熱煮沸5min的樣品

 4、 POD測定：立即以酶標(biāo)儀，以對照孔為對照，測定470nm處測定孔的吸光度(A測定0)；37℃準(zhǔn)確孵育3min后，立即加入5μl POD終止液終止反應(yīng)(備選方案)，以對照孔為對照，以酶標(biāo)儀測定470nm處測定孔的吸光度(A測定1)。

實驗結(jié)果：

全自動生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運輸要求：

1、動植物組織樣本(干冰運輸)

準(zhǔn)確稱取動物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進行測定。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運輸)

可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

4、細胞樣本

貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

懸浮細胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。

細胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！